时间分辨荧光在免疫分析中的应用进展（三）

2.2.1食品添加剂检测

5-单磷酸鸟苷(GMP)作为调味剂，时间广泛应用于各类食品。分辨分析过量摄入GMP会对人体造成危害。荧光应用因此，免疫Liu等通过柠檬酸盐(Cit)和稀土离子的进展自组装，成功制备了一种新型的时间稀土配位聚合物纳米材料Cit/Tb,用于婴幼儿配方食品和火腿样品中GMP的定量检测，对GMP具有良好的分辨分析选择性和灵敏度。

2.2.2药物残留检测

药物残留是荧光应用动物源食品检测中的一项重要指标,TRFIA不仅可用于奶制品中万古霉素、利福昔明、免疫呋喃它酮等抗生素，进展类药物的时间检测，还可以检测肉制品中瘦肉精类药物,分辨分析与其它传统方法相比，该方法检测灵敏度高、荧光应用特异性强、免疫与类似药物的进展交叉反应性均<1%。

2.2.3其它物质检测

真菌毒素是由于真菌在食品或者饲料里生长所产生的代谢产物，主要包括黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、T-2毒素等，近几年对其在食品检测方面的研究越来越受到关注。最近，Yang等建立了一种新的免疫分析方法，以Eu3+-DTTA作为第一探针，辣根过氧化物酶(HRP)作为第二探针，通过TRFIA、化学发光酶联免疫吸附分析(CL-ELISA)两种技术结合并行输入输出操作(PI-PO),实现对谷物中伏马菌素B1(FB1)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)及去环氧脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DOM-1)三种真菌毒素的同时检测，灵敏度分别为0.088ng/mL、4.74ng/mL和4.56ng/mL。

食源性致病菌作为引发食源性疾病的重要因素，已经引起社会各界的广泛重视。Wang等以大肠杆菌O157∶H7的O-特异链多糖组分单克隆抗体与Eu-螯合物结合，作为荧光标记物，通过TRFIA法快速、定量检测食品中大肠杆菌O157∶H7,最低检测限5×102CFU/mL。

2.3TRFIA在环境监测中的应用

TRFIA自开创以来，凭借其灵敏度高的优势(表3),在环境痕量检测领域发展迅速，主要应用包括药物残留、化工试剂及一些生物毒素的检测。

2.3.1药物残留检测

开展全面、系统的农药残留监测工作在一定程度上能够对土壤和水体环境风险进行评估。Shi等以Eu3+-DTTA和Sm3+-DTTA分别与两种单克隆抗体L1-Ab、A1P1-Ab偶联作为荧光标记物，建立了一种灵敏的双标记TRFIA法同时检测环境中吡虫啉和对硫磷，检测限分别为0.028μg/L和0.025μg/L,与气相色谱法相比，该方法能显著缩短样品前处理的时间消耗，并且实验结果可靠。

此外，近年来兽药残留逐渐成为主要环境污染物之一，国内外对其检测标准越来越高。最近，Zhang等利用牛血清白蛋白(BSA)与环丙沙星(CIP)偶联制备的免疫抗原，设计了一种对氟喹诺酮类药物(FQs)具有高特异性的单克隆抗体，在此基础上，建立了一种TRFIA法，用于高通量分析环境水体中12种FQs的总浓度，从而对镇江市内江地区的环境风险进行评估。

2.3.2化工试剂检测

邻苯二甲酸酯(PAEs)是目前应用最为广泛的一类化工试剂，我国许多地区的水环境均受到不同程度PAEs污染。Zhu等为监测镇江市河流中的痕量邻苯二甲酸二乙酯(DEP),建立了一种以磁性微粒(MPs)为固体载体的直接竞争TRFIA法。在检测系统中，以羊抗兔抗体为连接物，将抗DEP抗体固定在MPs表面，用Eu3+-螯合物标记DEP-OVA,通过TRFIA在环境水样品中检测到的DEP浓度为2.98～65.18ng/mL。

2.3.3生物毒素检测

除上述人工合成的环境污染物外，TRFIA还可以用于检测环境中的生物毒素。Niu等建立了间接竞争TRFIA法测定太湖源水中的微囊藻毒素-LR(MC-LR),检测限为0.01μg/L,动态测量范围为0.05～2μg/L,该方法凭借其高灵敏度和简便、快速的优点，取代了常规的色谱法和ELISA法，成为定量检测水样中MC-LR的新方法。

3总结与展望

时间分辨荧光免疫分析技术自从20世纪70年代末提出以来，其检测系统逐渐发展成熟，检测灵敏度不断提高，在痕量检测领域的应用越来越广泛。

然而，目前时间分辨荧光免疫技术还有很大的发展空间。在螯合剂设计方面，可以直接合成更多有效的亲水性有机配体，用于螯合稀土离子，制备荧光性能强、结构稳定、具有良好生物相容性的标记物，进一步扩大其应用范围；在稀土掺杂纳米材料制备方面，对已有的方法进行适当改进，或是提出新的、可行的制备方法，以获得高质量产物；在实际应用方面，在解离-增强镧系元素荧光分析系统、固相荧光(FIAgen)分析系统、酶放大分析系统和均相TRFIA分析系统的基础上逐步完善检测技术体系，拓宽TRFIA的应用领域，提高其检测灵敏度。此外，还可以将TRFIA技术与PCR、激光等技术联用，促进免疫分析技术的发展。随着国内外的深入研究，TRFIA技术将不断创新，其检测特异性、灵敏度进一步提高，在疾病诊断、食品安全和环境健康领域具有更广阔的应用前景。

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